Robert Reiner ble født i New York City, av Estelle Reiner (født Lebost) og Emmy-vinnende skuespiller, komiker, skribent og produsent Carl Reiner.
Som barn , han så ofte opp til faren sin som hans inspirasjon og forbilde. Carl Reiner var på The Dick Van Dyke Show, som han opprettet og også spilte i. Estelle var inspirasjonen til Rob Reiner å bli regissør. Hennes historie som sanger hjalp ham med å forstå hvordan musikk ble brukt i en scene. Rob følte seg ofte presset over å måle seg til farens tolv emmier, og prestisjetunge priser og vellykket strek.
Da Rob gikk ut av videregående skole, rådet foreldrene ham til å delta på sommerteatret. Reiner fikk jobb som lærling i Bucks County Playhouse i Pennsylvania. Han ble videreutdannet ved UCLA Film School. Reiner følte at han fremdeles ikke hadde suksess, til og med å ha en tilbakevendende rolle på en av de største forestillingene i landet, All in the Family. Reiner begynte sin regi-karriere med de Oscar-nominerte filmene This Is Spinal Tap, Stand By Me og The Princess Bride.
Med disse suksessfulle billettfilmene i 1987 grunnla Reiner sitt eget produksjonsselskap, Castle Rock Entertainment, sammen med Martin Shafer, Andrew Scheinman, Glenn Padnick og Alan Horn. For Castle Rock Entertainment gikk han for å regissere de Oscar-nominerte filmene When Harry Met Sally, Misery og A Few Good Men. Reiner krediterer tidligere co-star Carroll O «Connor for å hjelpe ham med å komme inn i regissørbransjen, og vise Reiner tauene.
Reiner er også kjent som en politisk aktivist, medstifter av American Foundation for Equal Rights, en gruppe det var en rådgivning for ekteskap av samme kjønn. Reiner har snakket på flere samlinger om flere kontroversielle emner, og blir også sett på som en talsmann for sosiale spørsmål, som vold i hjemmet og tobakkbruk.
Reiner har også laget komos på viser som 30 Rock, The Simpsons og Hannah Montana, og i filmene The First Wives Club, Bullets Over Broadway, Primary Colors og Throw Momma From The Train, blant mange andre.