áttekintése A reverz transzkripció akkor kezdődik, amikor a vírusrészecske belép a célsejt citoplazmájába. A vírusos RNS-genom egy nem jól jellemzett nukleoprotein-komplex részeként jut be a citoplazmába. A reverz transzkripció folyamata a citoplazmában egy bonyolult lépéssorozaton keresztül lineáris DNS duplexet generál. Ez a DNS kolináris az RNS-templátjával, de terminális duplikációkat tartalmaz, amelyek a hosszú terminális ismétlések (LTR) néven ismertek, és amelyek nincsenek a vírusos RNS-ben (1. ábra). A reverz transzkripció létező modelljei azt javasolják, hogy két speciális sablonkapcsolóra, amelyeket száltranszfer-reakcióknak vagy “ugrásoknak” neveznek, szükség van az LTR-ek előállításához.
1. ábra
A vírusos RNS genom reverz transzkripciója lineáris DNS duplexet generál, az R, U5 és U3 régiók, a polipurin traktus (PPT) és a primerkötő hely pozíciói A fordított transzkripció az U5 duplikációit eredményezi (tovább …)
A retrovírus-DNS-szintézis abszolút függ az RT két különálló enzimatikus aktivitásától: a DNS-polimeráz, amely vagy RNS-t, vagy DNS-t használhat templátként, és egy nukleáz, az úgynevezett ribonukleáz H (RNáz H), amely specifikus az RNS RNS-szálára: DNS-duplexek. Bár nem zárható ki más fehérjék szerepe, és valószínű, hogy bizonyos vírusfehérjék (pl. nukleokapszid, NC) növelik a reverz transzkripció hatékonyságát, a c a retrovírusos DNS előállításában szerepet játszó lépések sora teljes egészében a DNS polimerázának vagy az RT RNázának H tulajdonítható. A retrovírus-DNS-szintézis folyamata feltételezhető, hogy a 2. ábrán vázolt sémát követi:
A mínuszszálú DNS-szintézist egy részben letekeredett transzfer RNS 3-végével kezdjük meg, amelyet a primer-kötéshez hevítünk. hely (PBS) a genomi RNS-ben, primerként. A mínuszszálú DNS-szintézis addig folytatódik, amíg a genomiális RNS 5-végét el nem éri, és diszkrét hosszúságú DNS-köztitermesztést eredményez, amelyet mínuszszálú erős-stop DNS-nek (–sssDNS) nevezünk. Mivel a tRNS-primer kötődési helye a vírusos RNS 5-végének közelében van, az –sssDNS viszonylag rövid, 100–150 bázis nagyságrendű.
Az RNS-szál RNáz-H által közvetített lebontását követően az RNS-ből: –sssDNS duplex, az első száltranszfer miatt –sssDNS egy vírusgenom RNS 3′-végéhez kapcsolódik. Ezt a transzfert azonos szekvenciák, az ismételt (R) szekvenciák közvetítik, amelyek az RNS genom 5- és 3-végén vannak jelen. Az -sssDNS 3-végét a vírusgenom 5-végén lévő R szekvenciákról másoltuk, és ezért az R-vel komplementer szekvenciákat tartalmaz. Az RNS-templát eltávolítása után az -sssDNS a 3-nél lévő R szekvenciákra képes lágyulni az RNS genomjának vége. Úgy tűnik, hogy a hőkezelési reakciót az NC megkönnyíti.
Miután az –sssDNS-t a vírusos RNS-n átvisszük a 3′R szegmensbe, folytatódik a mínusz szálú DNS szintézis, a templát RNáz H emésztésével együtt. part. Ez a lebomlás azonban nem teljes.
Az RNS genom egy rövid polipurin traktust (PPT) tartalmaz, amely viszonylag ellenáll az RNáz H lebomlásának. A PPT-ből származó meghatározott RNS-szegmens elősegíti a pluszszálú DNS-szintézist. A pluszszálú szintézist leállítjuk, miután a primer tRNS egy része reverz transzkripcióval íródik le, így egy pluszszálú erős-stop DNS (+ sssDNS) nevű DNS-t kapunk. Bár a retrovírusok minden törzse meghatározott pluszszálú primert generál a PPT-ből, egyes vírusok további pluszszálú primereket generálnak az RNS genomjából. komplementer a pluszszálú DNS 3-végén vagy annak közelében lévő szekvenciákkal.
A komplementer PBS-szegmensek + sssDNS-ben és a mínusz-szálas DNS-ben történő megkötése képezi a második száltranszfert.
Ezután a plusz- és a mínuszszálú szintézisek befejeződnek, a DNS plusz- és mínuszszálak szolgálnak templátként a másik szálhoz.
2. ábra
A retrovírus genom reverz transzkripciójának folyamata. (Fekete vonal) RNS; (világos színű) mínusz szálú DNS-ek; (sötét színű) plusz szálú DNS. A folyamat leírását lásd a szövegben.
E lépések részletesebb leírását az alábbiakban mutatjuk be.