Am 18. Oktober 1767 schließen Charles Mason und Jeremiah Dixon ihre Untersuchung der Grenze zwischen den Kolonien Pennsylvania und Maryland sowie der Gebiete ab, die würde schließlich die Bundesstaaten Delaware und West Virginia werden. Die Familien Penn und Calvert hatten die englischen Landvermesser Mason und Dixon beauftragt, ihren Streit über die Grenze zwischen ihren beiden geschützten Kolonien Pennsylvania und Maryland beizulegen.
1760 müde von der Grenzgewalt zwischen den Siedlern der Kolonien Die britische Krone forderte die beteiligten Parteien auf, an einer 1732 erzielten Einigung festzuhalten. Im Rahmen der Einhaltung dieses königlichen Kommandos durch Maryland und Pennsylvania wurden Mason und Dixon gebeten, den genauen Verbleib der Grenze zwischen den beiden Kolonien zu bestimmen. Obwohl beide Kolonien das Gebiet zwischen dem 39. und 40. Breitengrad beanspruchten, setzte die heutige Mason-Dixon-Linie die Grenze schließlich auf einem nördlichen Breitengrad von 39 Grad und 43 Minuten fest. Die Linie war mit Steinen markiert, mit dem Wappen von Pennsylvania auf der einen Seite und dem von Maryland auf der anderen Seite.
Als Mason und Dixon 1763 ihre Bemühungen begannen, protestierten Kolonisten gegen die Proklamation von 1763, die Kolonisten verhindern sollte von jenseits der Appalachen niederzulassen und Indianer zu verärgern. Als die Briten 1767 ihre Umfrage abschlossen, gerieten die Kolonien in einen Streit mit dem Parlament über die Townshend Acts, mit denen die Einnahmen des Imperiums durch die Besteuerung gemeinsamer Importe einschließlich Tee erhöht werden sollten.
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Zwanzig Jahre später, Ende des 18. Jahrhunderts, begannen die Staaten südlich der Mason-Dixon-Linie, sich für die Aufrechterhaltung der Sklaverei in den neuen Vereinigten Staaten einzusetzen, während die Staaten nördlich der Linie hoffte, das Eigentum an menschlichen Sachen auslaufen zu lassen. Diese Periode, die Historiker als die Ära der „Neuen Republik“ betrachten, ging mit dem Missouri-Kompromiss von 1820 zu Ende, der die Staaten südlich der Linie als Sklavenhalter und diejenigen nördlich der Linie als frei akzeptierte. zusammen mit denen, die ihm folgten, scheiterten sie schließlich.
Hundert Jahre nachdem Mason und Dixon begonnen hatten, die Grenze zu bestimmen, ließen Soldaten von gegenüberliegenden Seiten der Linie ihr Blut die Felder von Gettysburg, Pennsylvania, beflecken. Bei dem letzten und tödlichen Versuch der südlichen Staaten, die Mason-Dixon-Linie während des Bürgerkriegs zu durchbrechen. Einhundertundein Jahre nachdem die Briten ihre Linie fertiggestellt hatten, ließen die Vereinigten Staaten schließlich Männer jeder Hautfarbe, die innerhalb der Nation geboren wurden, zu den Rechten von Staatsbürgerschaft mit der Ratifizierung der 14. Änderung.